Диагностика гепатита С: анализ ПЦР и как считается вирусная нагрузка

Автор: | 23.04.2020

Данная статья не является медицинским пособием и руководством для пациентов. Вся информация представлена поверхностно в ознакомительных целях. О современных методах диагностики гепатита С узнайте у лечащего врача, терапевта, гепатолога.

Количественный ПЦР анализ на гепатит С – один из видов диагностики, главная цель которого заключается в определении вирусной нагрузки. Грубо говоря, определяют, сколько вируса (его РНК) в крови пациента (вирусная нагрузка). Обычно считают количество копий вируса в одном миллилитре крови.

Называется анализ ПЦР, так как в его основе лежит метод Полимеразной Цепной Реакции, проводится на молекулярно-биологическом уровне.

По результатам анализа, который показывает нынешнюю вирусную нагрузку у конкретного пациента, назначают индивидуальную схему лечения. Повторно анализ сдают уже во время терапии, чтобы понять, насколько эффективна схема и выбранные препараты. Если количество вируса в крови не снижается, то в терапию вносят коррективы – повышают дозы или меняют комбинацию препаратов. Если вирусная нагрузка снижается – это, наоборот, хороший знак.

Анализ рекомендуют сдавать на всех стадиях лечения. Снижение вирусной нагрузки и концентрации РНК вируса гепатита С в крови говорит о том, что лечение работает, и что вероятность устойчивого вирусологического ответа (УВО) растет. В то же время анализ позволяет понять, какую схему лечения назначать и насколько эффективна противовирусная терапия, если она уже проводится.

Показания для проведения анализа ПЦР

Софосбувир Даклатасвир из Нижнего НовгородаОсновная задача ПЦР анализа – определить, есть ли в крови РНК или ДНК вируса (возбудителя болезни), а также понять, сколько их количественно. В случае с гепатитом С подсчитывают копии вируса в 1 миллилитре биоматериала, взятого на анализ (крови).

Как правило, лабораторный анализ ПЦР проводится, если в крови обнаружены антитела к вирусу гепатита С, при положительном качественном анализе. Кроме того, количественный ПЦР сдают при заражении сразу несколькими гепатитными инфекциями (микст-гепатитами). Анализ также позволяет прогнозировать осложнения.

Кроме того, ПЦР сдают перед началом противовирусной терапии и во время терапии для определения ее эффективности.

Какие виды ПЦР анализа проводят в лабораториях

Если есть подозрения, что человек заражен вирусом гепатита С, врач может назначить три анализа ПЦР:

  • качественный – показывает, есть ли вирус в биоматериале
  • генотипирование – показывает, какой генотип вируса
  • количественный – показывает, сколько вируса в крови количественно (МЕ/мл)

Количественный ПЦР бывает нескольких типов в зависимости от применяемой методики – первый берет за основу метод разветвленной ДНК, второй – метод транскрипционной амплификации. Он же метод TMA.

Метод разветвленной ДНК не подходит при минимальной вирусной нагрузке, так как он считает количество вируса в крови от 500 МЕ/мл. Суть метода – использование специальных «зондов». Первый связывает РНК вируса с искусственной разветвленной ДНК, а второй – связывается с уже привязанной к РНК вируса разветвленной ДНК, которые вместе подсвечиваются в ультрафиолете и подсчитываются.

Метод TMA позволяет подсчитывать количество вируса в крови при показателях от 5 МЕ/мл. Подразумевает использование ферментов и почти всегда гексамеров – специальных полимеров.

Real-Time ПЦР (ПЦР в реальном времени) – наиболее «чувствительный» количественный тест, который позволяет посчитать число копий вируса гепатита С в крови даже при минимальных значениях (от 50 МЕ/мл). При сомнительных результатах проводятся ультра-тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл

Этапы проведения ПЦР анализа на гепатит С

Для проведения количественного ПЦР на гепатит С берут венозную кровь. Важно соблюдать рекомендации врача перед проведением анализа, чтобы результаты были предельно четкими.

После того, как биоматериал забран, приступают непосредственно к лабораторному исследованию. Рассмотрим один из методов.

  1. На первом этапе из крови выделяют РНК вируса.
  2. Пробирку с РНК помещают в термостат. Благодаря ряду специфических операций в пробирке накапливается достаточное для анализа количество РНК.
  3. Затем полученный материал перемещают в другую подготовленную форму, подвергают электрофорезу, впоследствии чего РНК фрагменты становятся различимыми и их удается посчитать.

Этапы, их количество, последовательность и конкретные действия могут меняться в зависимости от выбранного метода ПЦР диагностики.

Как расшифровать результаты анализа

Результаты полученного ПЦР анализа расшифровываются врачом. Он сравнивает их с нормой, смотрит на тенденцию и определяет, какую схему лечения назначить, а если терапия уже проводится – стоит ли ее корректировать, менять ли дозировки, продолжительность, комбинации препаратов и так далее.

Выделяют несколько диапазонов количественных показателей, то есть диапазонов вирусной нагрузки.

  1. Если МЕ/мл не обнаружено. Значит, вируса в крови нет или выбранная методика диагностики не смогла определить это значение, так как оно ниже порога чувствительности.
  2. Если МЕ/мл до до 3*10^4. При данных результатах ПЦР анализа считается, что вирусная нагрузка низкая.
  3. Если МЕ/мл от 3*10^4 до 8*10^5. Если показатели анализа попадают в этот диапазон, то уровень вирусной нагрузки определяется, как «средний».
  4. Если МЕ/мл выше отметки 8*10^5, то уровень вирусной нагрузки считается высоким.

Высокая концентрация вируса в крови – это риск осложнений, поэтому при таких анализах терапию стараются начать как можно раньше. Чем ниже вирусная нагрузка – тем больше вероятность, что лечение закончится УВО.

Тем не менее, стоит помнить, что прямой взаимосвязи между показателем МЕ/мл и тяжестью течения гепатита С нет. Для определения тяжести повреждений печени и ее структурных изменений назначают другие исследования, в том числе аппаратные.

Что нельзя делать перед и во время анализа ПЦР

Исказить результаты количественного исследования в той или иной мере могут разные факторы, зависящие и не зависящие от пациента.

Например, на объективность результатов негативно влияют нарушение антисептических норм в лаборатории, ошибки лаборанта, неправильный забор или хранение крови.

Сами пациенты также нередко становятся причиной искажения данных исследования, принимая перед анализом некоторые препараты (например, гепарин) или игнорируя правила подготовки к ПЦР.

Поэтому перед проведением анализа узнайте у врача, как подготовиться к забору материала, что можно и что нельзя делать, чтобы результаты ПЦР были наиболее объективными и точными. Врач также скажет, в каких случаях нужно сдавать ПЦР, и если нужно, то с какой периодичностью.